99mTc-HYNIC/Cy7-Fab(Bevacizumab): su empleo como agente de imagen en mieloma múltiple / 99mTc-HYNIC/Cy7-Fab(Bevacizumab): its use as an imaging agent in Multiple Myeloma / 99mTc-HYNIC/Cy7-Fab (Bevacizumab): seu uso como agente de imagem em mieloma múltiplo

Introducción: el mieloma múltiple es un trastorno hematológico maligno y el segundo cáncer de la sangre más frecuente. El proceso de la angiogénesis tumoral es fundamental para el crecimiento y metástasis de muchos tipos de tumores, incluido en mieloma múltiple. Se sabe que la sobreexpresión del factor de crecimiento endothelial vascular se encuentra asociado a un mal pronóstico en esta patología, representando un blanco clave para la terapia anti-angiogénica en mieloma múltiple. El anticuerpo monoclonal Bevacizumab es capaz de unirse con gran afinidad al factor de crecimiento endothelial vascular bloqueando su acción. Objetivo: evaluar el Fab(Bevacizumab) marcado con 99mTc o Cy7 como potenciales agentes de imagen moleculares de la expresión de factor de crecimiento endothelial vascular en mieloma múltiple. Material y métodos: la expresión de factor de crecimiento endothelial vascular fue analizada mediante citometría de flujo en la línea celular huaman de mieloma múltiple, la MM1S. Fab(Bevacizumab) fue producido mediante digestión de Bevacizumab con papaína, conjugado a NHS-HYNIC-Tfa y radiomarcado con 99mTc. Se realizaron estudios de biodistribución y de tomografía computarizada por emisión del fotón simple. A su vez, Fab(Bevacizumab) fue marcado con Cy7 para obtener imágenes de fluorescencia in vivo hasta 96 horas. Resultados: el análisis por citometría de flujo en la línea celular MM1S reveló que la expresión de factor de crecimiento endothelial vascular es predominantemente intracelular. Los estudios de biodistribución y SPECT/CT del complejo 99mTc-HYNIC-Fab(Bevacizumab) mostraron una rápida eliminación sanguínea y una significativa captación a nivel renal y tumoral. Las imágenes por fluorescencia empleando Cy7-Fab(Bevacizumab) permitieron la visualización tumoral hasta 96 h p.i. Conclusiones: logramos visualizar la expresión de factor de crecimiento endothelial vascular in vivo en mieloma múltiple mediante el empleo del fragmento Fab del anticuerpo anti-VEGF (Bevacizumab) marcado con 99mTc y Cy7. Estos nuevos agentes de imagen molecular podrían ser empleados potencialmente en el ámbito clínico para la estadificación y el seguimiento de pacientes con mieloma múltiple, mediante la visualización radioactiva in vivo de la expresión de factor de crecimiento endothelial vascular en todo el cuerpo. La imagen óptica de estos trazadores mejoraría el muestreo tumoral y podría guiar la extirpación quirúrgica.

Introduction: Multiple myeloma is a hematologic malignancy and the second most common blood cancer. The process of tumor angiogenesis is central to the growth and metastasis of many types of tumors, including multiple myeloma. Overexpression of vascular endothelial growth factor is known to be associated with poor prognosis in this pathology, representing a key target for anti-angiogenic therapy in multiple myeloma. The monoclonal antibody Bevacizumab is able to bind with high affinity to vascular endothelial growth factor blocking its action. Objective: to evaluate 99mTc- or Cy7-labeled Fab(Bevacizumab) as potential molecular imaging agents of vascular endothelial growth factor expression in multiple myeloma. Methods: Vascular endothelial growth factor expression was analyzed by flow cytometry in the multiple myeloma huaman cell line, MM1S. Fab(Bevacizumab) was produced by digestion of Bevacizumab with papain, conjugated to NHS-HYNIC-Tfa and radiolabeled with 99mTc. Biodistribution and single photon emission computed tomography studies were performed. In turn, Fab(Bevacizumab) was labeled with Cy7 to obtain in vivo fluorescence images up to 96 hours. Results: Flow cytometry analysis in the MM1S cell line revealed that vascular endothelial growth factor expression is predominantly intracellular. Biodistribution and SPECT/CT studies of the 99mTc-HYNIC-Fab(Bevacizumab) complex showed rapid blood clearance and significant renal and tumor uptake. Fluorescence imaging using Cy7-Fab(Bevacizumab) allowed tumor visualization up to 96 h p.i. Conclusions: we were able to visualize vascular endothelial growth factor expression in vivo in multiple myeloma using the Fab fragment of the anti-VEGF antibody (Bevacizumab) labeled with 99mTc and Cy7. These new molecular imaging agents could potentially be employed in the clinical setting for staging and monitoring of patients with multiple myeloma by in vivo radioactive visualization of vascular endothelial growth factor expression throughout the body. Optical imaging of these tracers would improve tumor sampling and could guide surgical excision.

Introdução: O mieloma múltiplo é uma malignidade hematológica e o segundo câncer de sangue mais comum. O processo de angiogênese tumoral é fundamental para o crescimento e a metástase de muitos tipos de tumores, incluindo o mieloma múltiplo. Sabe-se que a superexpressão do fator de crescimento endotelial vascular está associada a um prognóstico ruim no mieloma múltiplo, representando um alvo importante para a terapia antiangiogênica no mieloma múltiplo. O anticorpo monoclonal Bevacizumab é capaz de se ligar com alta afinidade ao fator de crescimento endotelial vascular e bloquear sua ação. Objetivo: avaliar o Fab(Bevacizumab) marcado com 99mTc ou Cy7 como possíveis agentes de imagem molecular da expressão do fator de crescimento endotelial vascular no mieloma múltiplo. Métodos: A expressão do fator de crescimento endotelial vascular foi analisada por citometria de fluxo na linha celular de mieloma múltiplo MM1S. O Fab(Bevacizumab) foi produzido pela digestão do Bevacizumab com papaína, conjugado com NHS-HYNIC-Tfa e radiomarcado com 99mTc. Foram realizados estudos de biodistribuição e tomografia computadorizada por emissão de fóton único. Por sua vez, o Fab(Bevacizumab) foi marcado com Cy7 para geração de imagens de fluorescência in vivo por até 96 horas. Resultados: A análise de citometria de fluxo na linha celular MM1S revelou que a expressão do fator de crescimento endotelial vascular é predominantemente intracelular. Os estudos de biodistribuição e SPECT/CT do complexo 99mTc-HYNIC-Fab(Bevacizumab) mostraram uma rápida depuração sanguínea e uma captação renal e tumoral significativa. A imagem de fluorescência usando Cy7-Fab(Bevacizumab) permitiu a visualização do tumor até 96 horas p.i. Conclusões: Conseguimos visualizar a expressão do fator de crescimento endotelial vascular in vivo no mieloma múltiplo usando o fragmento Fab do anticorpo anti-VEGF (Bevacizumab) marcado com 99mTc e Cy7. Esses novos agentes de imagem molecular poderiam ser usados no cenário clínico para o estadiamento e o monitoramento de pacientes com mieloma múltiplo, visualizando radioativamente a expressão do fator de crescimento endotelial vascular in vivo em todo o corpo. A geração de imagens ópticas desses traçadores melhoraria a amostragem do tumor e poderia orientar a excisão cirúrgica.

Platelet activating factor receptor antagonists improve the efficacy of experimental chemo- and radiotherapy

Platelet activating factor is a lipid mediator of inflammation, and in recent decades, it has emerged as an important factor in tumor outcomes. Platelet activating factor acts by specific binding to its receptor, which is present in both tumor cells and cells that infiltrate tumors. Pro-tumorigenic effects of platelet activating factor receptor in tumors includes promotion of tumor cell proliferation, production of survival signals, migration of vascular cells and formation of new vessels and stimulation of dendritic cells and macrophages suppressor phenotype. In experimental models, blocking of platelet activating factor receptor reduced tumor growth and increased animal survival. During chemotherapy and radiotherapy, tumor cells that survive treatment undergo accelerated proliferation, a phenomenon known as tumor cell repopulation. Work from our group and others showed that these treatments induce overproduction of platelet activating factor-like molecules and increase expression of its receptor in tumor cells. In this scenario, antagonists of platelet activating factor markedly reduced tumor repopulation. Here, we note that combining chemo- and radiotherapy with platelet activating factor antagonists could be a promising strategy for cancer treatment.

Avaliação de aplicação única subconjuntival pré-operatória de mitomicina C em pterígio primário / Evaluation of preoperative subconjunctival single application of mitomycin C in primary pterygium

Resumo Pterígios são lesões geralmente benignas que na maioria dos casos não requer tratamento específico. É um crescimento fibrovascular sobre a córnea, geralmente a partir do lado nasal. Sua causa ainda não foi elucidada, mas parece estar relacionada à exposição aos raios ultravioleta. Quando os sintomas não são controlados com tratamento conservador, a cirurgia é indicada, porém o índice de recidiva ainda é alto, e os esforços têm sido no sentido de reduzir esse índice. A mitomicina C (MMC) é uma opção de adjuvante à cirurgia por ser um inibidor da proliferação de fibroblastos, diminuindo o risco de recorrência do pterígio. Relatamos aqui um caso que descreve cirurgia de pterígio realizada em ambos os olhos de uma mesma paciente, sendo um com MMC e outro sem ela. Os resultados e o índice de proliferação celular dos dois olhos foram comparados entre si.

Abstract Pterygia are usually benign lesions that do not require specific treatment. It is a fibrovascular growth onto the nasal side of the cornea. It`s cause has not been fully elucidated yet, but seems to be related to long -term ultraviolet ray exposure. When symptoms are not controlled with conservative treatment surgery is considered, but the recurrence rate is still high, and efforts have been made to avoid it. Mitomycin C (MMC) is a fibroblast proliferation inhibitor that can be used as adjuvant to surgery to reduce recurrence. We report here a case that describes pterygium surgery performed in both eyes of the same patient, being one with MMC and the other eye without it. Both pterygium were sent to laboratory analysis. The results and proliferation index were compared between the eyes.

Expressão de galectina-3 e beta-catenina em lesões pré-malignas e carcinomatosas de língua de camundongos / Galectin-3 and beta-catenin expression in premalignant and carcinomatous lesions in tongue of mice

INTRODUÇÃO: A galectina-3 (GAL3) apresenta importantes papéis na biologia tumoral e recentemente foi mostrada a sua participação na via de sinalização Wnt, translocando a beta-catenina para o núcleo. Expressão alterada de GAL3 e beta-catenina tem sido descrita em cânceres, mas não há estudos avaliando a expressão de ambas em displasias e carcinomas desenvolvidos em modelos de carcinogênese de língua. OBJETIVOS: Estudar a expressão de GAL3 e beta-catenina em lesões displásicas e carcinomas induzidos experimentalmente em língua de camundongos. MATERIAL E MÉTODOS: Vinte camundongos C57BL/6 machos foram desafiados com 4NQO na água de beber por 16 semanas e sacrificados na semana 16 e 32. Após o sacrifício, as línguas foram removidas, processadas, coradas por hematoxilina e eosina (HE) para detecção de displasias e carcinomas. Ensaio imuno-histoquímico foi realizado para determinar o índice de positividade para GAL3 e beta-catenina nessas lesões, bem como uma correlação entre elas em carcinomas. RESULTADOS: O número de camundongos afetados por carcinoma aumentou entre as semanas 16 e 32 (22,2 por cento vs. 88,9 por cento) e o de displasia diminuiu (66,7 por cento vs. 11,1 por cento). Um aumento de células positivas para beta-catenina não membranosa e GAL3 citoplasmática foi observado nas displasias e nos carcinomas, mas essa diferença não foi estatisticamente significativa. No entanto, um aumento estatisticamente significativo de GAL3 nuclear foi observado na evolução de displasia para carcinoma (p = 0,04). Nenhuma correlação foi encontrada entre beta-catenina e GAL3. CONCLUSÃO: Tanto nas displasias quanto nos carcinomas a via de sinalização Wnt está ativa, e o aumento de GAL3 nuclear nos carcinomas sugere um papel na transformação maligna do epitélio lingual.

INTRODUCTION: Galectin-3 plays pivotal role in tumor biology and its participation in Wnt signaling pathway translocating beta-catenin into the nucleus has been recently demonstrated. Altered galectin-3 and beta-catenin expressions have been described in different tumors, however, there are no studies evaluating their expression in dysplasias and carcinomas induced in carcinogenic tongue models. OBJECTIVES: To study galectin-3 and beta-catenin expressions in dysplasias and carcinomas experimentally induced in mouse tongue. METHODS: Twenty C57Bl/6 male mice were treated with 4NQO in their drinking water for 16 weeks and sacrificed at weeks 16 and 32. Tongues were removed, routinely processed, and stained with hematoxylin and eosin to detect dysplasias and carcinomas. An immunohistochemical assay was performed to determine the level of positivity for galectin-3 and beta-catenin in these lesions as well as their correlation in carcinomas. RESULTS: The number of mice affected by carcinomas increased from week 16 to week 32 (22.2 percent vs. 88.9 percent) and the number affected by dysplasias decreased (66.7 percent vs. 11.1 percent). There was an increase in non-membranous beta-catenin- and cytoplasmic galectin-3-positive cells in dysplasias and carcinomas, although this difference was not statiscally significant. Nonetheless, there was a significant increase of nuclear galectin-3-positive cells in the evolution from dysplasia to carcinoma (p = 0.04). There was no correlation between beta-catenin and galectin-3. CONCLUSION: Wnt signaling pathway is active in both dysplasias and carcinomas and the increase of nuclear galectin-3-positive cells in carcinomas suggests its influence on malignant transformation in the tongue epithelium.

Morphological alterations and G0/G1 cell cycle arrest induced by curcumin in human SK-MEL-37 melanoma cells

The aim of this work was to study the effect of curcumin on cell cycle in the human SK-MEL-37 melanoma cell line. In addition, morphological and structural analyses were also performed. Flow cytometric analysis showed a G0/G1 arrest at 5 µM after 24 h exposure and a concentration-dependent increase in the proportion of sub-G0 hypodiploid cells. Typical apoptotic events were also observed by the fluorescence microscopy, transmission and scanning electronic microscopy. Loss of mitochondrial membrane potential was not detected. Results suggested that curcumin could arrest human melanoma cells at G0/G1 phase and induce a mitochondrial-independent apoptotic pathway.

O melanoma é um tipo agressivo de câncer cujo tratamento culmina com o estabelecimento de resistência aos quimioterápicos empregados. Portanto, é importante o desenvolvimento de novos agentes farmacológicos que sejam menos tóxicos e que não provoquem quimiorresistência. As inúmeras propriedades terapêuticas da curcumina vêm sendo confirmadas através de estudos sobre o seu mecanismo de ação em células cultivadas. No presente estudo, empregamos células de melanoma humano da linhagem SK-MEL-37, que desenvolveram resistência in vitro à doxorubicina e cisplatina, drogas normalmente utilizadas na clínica. Investigamos o efeito da curcumina sobre o ciclo celular através de citometria de fluxo. Além disso, análises morfológicas e estruturais também foram realizadas. Os resultados demonstraram que o tratamento com uma concentração de 5 ?M de curcumina provocou uma parada na subfase G0/G1. Além disso, observou-se um aumento dose-dependente na proporção de células hipodiplóides em sub-G0. Eventos apoptóticos típicos foram observados por microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia eletrônica de varredura. Não foi detectada alteração no potencial de membrana mitocondrial. Os resultados indicam que futuros estudos poderão tornar possível a utilização da curcumina como um modulador para agentes quimioterápicos empregados na clínica no tratamento do melanoma.

Câncer e o microambiente tumoral / Cancer and the tumor microenvironment

Antes tido como um conjunto de células alteradas em proliferação, hoje o cânceré mais bem entendido como um microambiente, em que as interações entre os elementos celulares e moleculares que o compõem são determinantes na progressão tumoral. Como resultado, a compreensão do evento neoplásico ganha complexidade crescente. A dinâmica das células tumorais passa a ser avaliada como parte de um verdadeiro tecido tumoral, sujeita a condições de vascularização, de oxigenação, de pressão intersticial e de necrose tecidual, que influenciam na cinética tumoral. Estão sendo identificados novos componentes deste nicho tumoral e as suas respectivas atuações. Entre esses integrantes, encontram-se os elementos da imunidade, cuja modulação tem sido demonstrada por uma série de pesquisas aqui revisadas, tanto no sentido da vigilância imunológica, como pressão seletiva negativa, quanto nofavorecimento da progressão tumoral. Esta revisão analisará a neoplasia do ponto de vista de um microambiente tumoral, focando na participação imunológica e na cinética tumoral, expondo as principais idéias e descobertas que criaram e estão aperfeiçoando o conceito de câncer.

Formerly referred to as a group of altered cells in proliferation, today cancer is better understood as a microenvironment, in which the interactions between the cellular andmolecular elements are determinative in tumor progression. As a result, the comprehension of a neoplasic event gains increasing complexity. The dynamics of the tumor cells are nowanalyzed as part of a true tumoral tissue, subject to conditions of vascularization, oxygenation, interstitial pressure and tissue necrosis, which influence tumor kinetics. New components of this tumoral niche and their respective actions are being identified. Among these constituentsare the elements of the immune system which, as a series of experiments have shown, are involved in the aspect of immunosurveillance, as negative selective pressure, as well as inmechanisms of tumor progression. This review will analyze neoplasia as a tumor microenvironment, focusing on immunological participation and on tumor kinetics, and exposing the mainideas and discoveries that created and are improving the concept of cancer.

Estudo da expressão de galectina-3 em carcinomas de língua de camundongos / Study of the galectin-3 expression in tongue carcinomas of mice

INTRODUÇÃO: A galectina-3 (Gal-3) é uma lectina de mamíferos ligante de resíduos b-galactosídeos. Numerosos estudos têm mostrado que a Gal-3 apresenta importantes papéis na biologia tumoral, atuando em fenômenos como apoptose, metástase e transformação maligna. No entanto, em carcinomas de cabeça e pescoço, a real significância da sua expressão ainda é pouco compreendida. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de Gal-3 em tumores de língua induzidos experimentalmente em camundongos desafiados com o carcinógeno 4-nitroquinolona-1-óxido (4NQO). MATERIAL E MÉTODOS: Quarenta e dois camundongos C57BL/6, machos, foram desafiados com 4NQO na água de beber por 16 semanas e sacrificados em diferentes períodos depois do tratamento. Após o sacrifício, as línguas foram removidas, processadas, coradas por hematoxilina e eosina (HE) e microscopicamente analisadas quanto à presença de carcinoma. Ensaio imuno-histoquímico para detecção do antígeno Gal-3 e análise descritiva da sua expressão nos tumores induzidos foram realizados. RESULTADOS: Ao final do experimento, foram produzidos 15 tumores. No tecido epitelial não-neoplásico, forte imunorreatividade foi observada apenas na camada parabasal. Nas camadas mais superficiais a intensidade de marcação foi mais fraca, e na camada basal variou de ausente a fraca. Todos os carcinomas bem diferenciados exibiram fraca marcação, exceto nas áreas queratinizantes. No único caso de carcinoma pouco diferenciado, forte imunorreatividade para Gal-3 foi observada. CONCLUSÃO: Nossos resultados descritivos mostram que a transformação maligna é acompanhada de redução da intensidade de expressão da Gal-3 e que o aumento da sua expressão com a perda da diferenciação neoplásica sugere a sua vinculação com agressividade tumoral.

BACKGROUND: Galectin-3 (Gal-3) is a b-galactoside-binding mammalian lectin. Numerous studies have demonstrated that Gal-3 plays an important role in tumor biology, acting in some events such as apoptosis, metastasis and malignant transformation. However, in carcinomas of head and neck, the real significance of Gal-3 expression requires a better understanding. OBJECTIVES: The aim of this paper was to evaluate Gal-3 expression in tongue carcinomas experimentally induced in mice challenged with carcinogen 4-nitroquinoline-1-oxide (4NQO). MATERIAL AND METHOD: Forty-two C57BL/6 male mice were challenged with 4NQO in drinking water for 16 weeks and killed at different periods after induction. In each period, their tongues were removed, routinely processed, stained with hematoxylin and eosin (H&E) and microscopically analyzed as to the presence of carcinoma. Immunohistochemical test for Gal-3 and a descriptive analysis of its expression in induced tumors were performed. RESULTS: By the end of the experiment, 15 tumors had been induced. In the non-neoplastic lingual epithelium, strong and weak immunoreactivity for Gal-3 was noted in parabasal and superficial layers, respectively. In the basal layer, Gal-3 expression varied from absent to weak. All the well-differentiated carcinomas showed weak immunoreactivity for Gal-3, except in keratinized areas. The only case of poorly differentiated squamous cell carcinoma indicated strong immunoreactivity for Gal-3. CONCLUSION: Our results show that malignant transformation is associated with reduced expression of Gal-3, whereas its increased expression in poorly differentiated carcinoma seems to be connected with tumor aggressiveness.

Aspectos celulares e moleculares da progressäo tumoral / Cellular and molecular aspects of tumor progression

A carcinogênese é um processo de múltiplas etapas, a partir do qual uma célula normal passa a adquirir progressivamente características de imortalizaçäo, capacidade de gerar tumores, e finalmente capacidade de invadir tecidos normais e colonizar órgäos à distância. Neste artigo, säo revistas as principais fases da progressäo tumoral a nível molecular. Nesta abordagem, baseiam-se as atuais estratégias de definiçäo de fatores diagnósticos, prognósticos e, por vezes, terapêuticos a serem usados em Oncologia nos próximos anos. Demos ênfase a alguns aspectos que estäo sendo estudados em nosso meio, com possível aplicaçäo clínica

Aspectos funcionais da glicosilacao de um receptor de laminina de melanoma murino / Functional aspects of the glycosylation in the receptor of laminin of murine melanoma

A interacao entre a laminina e gp120 140, uma proteina de celulas B16-F10, imunoquimicamente relacionada a alfa-6 beta-1 integrina, e dependente de oligossacaridios N-ligados presentes no receptor. Analise com lectinas de especificidades conhecidas permitiu concluir que gp120/140 e uma sialoglicoproteina, apresentando principalmente complexos antenarios, entre as estruturas N-ligadas. Ainda, foi possivel mostrar que gp120/140 apresenta residuos de alfa-galactose terminais. Por meio de tratamento com exoglicosidases, foi possivel mostrar que residuos alfa-gal presentes na cadeia alfa sao determinantes da interacao com laminina, em ensaios de ligand blotting. Estes residuos estao associados ao fenomeno de adesao celular. De outro lado, a cadeia beta-1, apresenta complexos tri- e tetra-antenarios, cuja sintese pode ser inibida indiretamente por swainsonina. Estes complexos parecem estar associados ao fenomeno de espalhamento celular. Mostrou-se ser possivel modular as funcoes de adesao e espalhamento mediadas por integrinas modificando-se o estado de glicolisacao de suas cadeias